Annexin V-PE/7-AAD凋亡检测试剂盒
产品名称： Annexin V-PE/7-AAD凋亡检测试剂盒
英文名称： Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit
产品编号： C331407
产品价格： 480
产品产地： 美国
品牌商标： Arcegen
更新时间： 2025-05-07T15:26:53
使用范围： null
| 规格 | 价格 |
| 20T | 480.0 |
| 50T | 960.0 |
| 100T | 1680.0 |
- 联系人 : 钟珍
- 地址 : 申江南路4388号1幢2层208室
- 邮编 : 201314
- 所在区域 : 上海
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产品简介
Annexin V-PE/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒是用红色荧光染料PE（Phycoerythrin）标记的Annexin V作为探针，来检测细胞早期凋亡的发生，可用荧光显微镜、流式细胞仪或其他荧光检测设备进行检测。
检测原理：在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine，PS）位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。Annexin-Ⅴ（膜联蛋白-V）是一种分子量为35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。7-AAD是一种核酸染料，同PI有着相似的荧光特性，但其发射光谱较PI窄，对其他检测通道的干扰更小，在多色荧光分析中是PI的最佳替代品，可与Annexin V联合使用。该染料不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整的细胞膜，但可穿透晚期凋亡细胞或者坏死细胞并与其内的DNA结合。因此将Annexin V-PE与7-AAD联合使用时，7-AAD则被排除在活细胞（Annexin V-/7-AAD-）和早期凋亡细胞（Annexin V+/7-AAD-）之外，而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被Annexin V-PE和7-AAD结合染色呈现双阳性（Annexin V+/7-AAD+）。
产品规格
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货号 |
C331407E/C331407S/C331407M |
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规格 |
20 T/50 T/100 T |
组分信息
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组分编号 |
组分名称 |
C331407E |
C331407S |
C331407M |
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C331407-A |
重组人Annexin V/PE*（rh Annexin V/PE） |
100 μL |
250 μL |
500 μL |
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C331407-B |
7-AAD Viability Staining Solution（20 µg/mL） |
200 μL |
500 μL |
1 mL |
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C331407-C |
4×Binding Buffer |
4 mL |
10 mL |
20 mL |
*来源于大肠杆菌（E.coli），分子量为35.8 KDa，纯度＞98%（SDS-PAGE & HPLC）
储存条件
冰袋（wet ice）运输。本试剂盒中所有组分均在4 ℃保存，勿冰冻。Annexin V-PE、7-AAD需避光保存。一年有效。
注意事项
- 由于细胞凋亡是一个快速的过程，建议样品在染色后1小时之内进行分析。
- 贴壁细胞的消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免机械损伤。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇使胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段时间，待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。尽量不用含EDTA的胰酶消化液，EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
- 如果样品来源于血液，请务必除去血液中的血小板。血小板含有PS，可与Annexin V结合，从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并以200 g离心洗去血小板。
- 试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体集中至管底，避免开盖时液体洒落引起损失。
- Annexin V-PE和PI是光敏物质，操作时请注意避光。
- 7-AAD为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等。
- 本产品仅用于科研。
使用说明
一、样品染色
- 悬浮细胞：300 g，4℃离心5 min收集细胞。贴壁细胞：用不含EDTA的胰酶消化后，300 g，4℃离心5 min收集细胞。胰酶消化时间不宜过长，以防引起假阳性。
- 配制1×Binding Buffer：用去离子水4倍稀释4×Binding Buffer（4 mL 结合缓冲液+12 mL 去离子水）。
- 用4℃预冷的PBS洗涤细胞2次，每次均需300 g，4℃离心5 min。
- 加入1×Binding Buffer重悬细胞，调节其浓度为1-5×106细胞/mL。
- 取100 μL细胞悬液于5 mL流式管中，加入5 μL Annexin V-PE，轻轻混匀后于室温避光孵育5min。
- 加入10 μL PI（20 µg/mL）。
- 加入400 μL PBS Buffer，混匀，样品在1小时内检测。
【注意】为了避免洗涤细胞时损失细胞，在吸液时可以用大的Tip头套上小的Tip头吸液。
二、观察检测
- 流式细胞仪
- 用流式细胞仪检测，Annexin V-PE的激发波长Ex=488nm；发射波长Em=578 nm，发出橙红色荧光，建议使用FL2通道检测；7-AAD的激发波长Ex=546 nm；发射波长Em=647 nm，发出红色荧光，建议使用FL3通道检测。用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），PE为横坐标，7-AAD为纵坐标。每个样采集10,000 events。典型的实验中，细胞可以分成三个亚群，活细胞仅呈很低强度的背景荧光，早期凋亡细胞仅呈较强的橙红色荧光，晚期凋亡细胞呈橙红和红色荧光双重染色。
- 荧光补偿调节：使用未经凋亡诱导处理的正常细胞，作为对照进行荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。
- 荧光显微镜
- 滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上，并用盖玻片盖上细胞。
- 用PBS洗涤细胞两次。
- 在500 μL的Binding Buffer 中加入1 μL Annexin V-PE，5 μL 7-AAD染液混匀。
- 将上述溶液滴加于盖玻片表面，使长有细胞的盖玻片表面均匀覆盖。
- 室温避光孵育5 min。
- 将盖玻片倒置于载玻片上，在荧光显微镜下用双色滤光片观察。滤光片（罗丹明）观察Annexin V-PE 荧光信号呈橙红色；用激发波长546 nm，发射波长647 nm，观察7-AAD荧光信号呈红色。